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      產品展示
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      RIPA裂解液

      • 型   號:
      • 價   格:
      • 更新時間:2021-06-09
      • 廠家性質:經銷商

      我們生產的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統的細胞組織快速裂解液。裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的Western、IP等。

       

      產品編號

      產品名稱

      產品包裝

      產品價格

      P0908

      RIPA裂解液強中弱套裝

      150ml

      280.00

        我們生產的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的Western、IP等。
        RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多種,根據其裂解液的強度大致可以分為強、中、弱三類。關于不同的RIPA裂解液以及我們生產的其它裂解液的主要特點和差異,以及如何選擇裂解液可參考附錄。
        RIPA裂解液強中弱套裝含有RIPA裂解液、RIPA裂解液RIPA裂解液50ml,便于實驗時探索不同的實驗條件。
        RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品,可以用我們生產的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度.
      包裝清單:

      產品編號

      產品名稱

      包裝

      P0902

      RIPA裂解液

      50ml

      P0904

      RIPA裂解液

      50ml

      P0906

      RIPA裂解液

      50ml

       

      PMSF100mM

      1.8ml

      說明書

      1

      保存條件:
        -20℃保存,一年有效。
      注意事項:
        為取得*的使用效果,盡量避免過多的反復凍融??梢赃m當分裝后使用。
        裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。
        關于裂解液的選擇,一方面可以參考我們生產的各種裂解液主要特點、差異,選擇合適的裂解液;另一方面也需要通過一些預實驗來摸索*的適合您實驗條件的裂解液。
        為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

      使用說明:
      對于培養細胞樣品:
      1.融解RIPA裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。
      2.對于貼壁細胞:去除培養液,用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后,細胞就會被裂解。
        對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成50-100萬細胞/管,然后再裂解。
      3.充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
        裂解液用量說明:通常6孔板每孔細胞加入150微升裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200微升或250微升。
      對于組織樣品:
      1.把組織剪切成細小的碎片。
      2.融解RIPA裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。
      3.按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量。
      4.
      用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
      5.充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
      6.如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
      注:RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物,屬正?,F象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續實驗;如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子,例如NFκB、p53等時,通常不必進行超聲處理,就可以檢測到這些轉錄因子。

      附:我們生產的各種裂解液主要特點、差異和選擇
      首先請參考下表,了解各種裂解液的主要特點和差異。

      產品編號

      P0907

       

      P0902

      P0904

      P0906

      P0910

      P0912

      產品名稱

      WesternIP細胞裂解液

      RIPA裂解液

      RIPA裂解液

      RIPA裂解液

      NP-40裂解液

      SDS裂解液

      有效裂解成分

      1% Triton X-100

      1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS

      1% NP-40, 0.5% deoxycholate, 0.1% SDS

      1% NP-40, 0.25% deoxycholate

      1% NP-40

      1% SDS

      裂解強度

      溫和

      溫和

      溫和

      對膜蛋白的提取

      一般

      很好

      較好

      一般

      一般

      很好

      對胞漿蛋白的提取

      很好

      很好

      很好

      很好

      很好

      很好

      對核蛋白的提取

      較好

      很好

      較好

      較好

      較好

      很好

      胞漿磷酸化蛋白提取

      很好

      很好

      很好

      很好

      很好

      很好

      細胞核轉錄因子提取

      很好

      很好

      很好

      很好

      很好

      很好

      含蛋白酶抑制劑

      含磷酸酯酶抑制劑

      主要用途

      WB, IP,co-IP

      WB, IP

      WB, IP

      WB, IP, co-IP

      WB, IP,co-IP

      WB, ChIP

        用于普通的Western、IPco-IP,我們推薦使用WesternIP細胞裂解液(P0907),該裂解液已被國內各大研究機構廣泛使用,用戶普遍反映很好。裂解細胞或組織后,沒有非常粘滯的透明狀DNA團塊形成,不必采用超聲處理等就可以非常理想地用于后續操作。另外該裂解液裂解的產物也適合用于磷酸化蛋白的Western檢測。
        對于某些特殊蛋白的IP,如果發現WesternIP細胞裂解液(P0907)效果不是非常理想,可以嘗試用RIPA裂解液強、中或弱NP-40裂解液。如果發現IP的時候背景很高,即非特異的蛋白也被IP下來,則需要選用裂解強度較高的裂解液,例如RIPA裂解液強或中。如果發現目的蛋白無法被IP下來,則說明裂解液的強度過強,可以使用較為溫和的裂解液例如RIPA裂解液NP-40裂解液。
        對于某些難溶解蛋白的Western,如果發現WesternIP細胞裂解液(P0907)效果不是非常理想,可以嘗試使用裂解強度更高的裂解液例如RIPA裂解液強、中SDS裂解液。

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